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本作主人公“殺手先生”（櫻井孝宏 配音）是一名職業殺手，只要接到委托就什么都殺，甚至是自己的父母或者是小學生的暑假作業。他有個弟子，是父母雙亡的小學生，因為崇拜殺手先生而拜其為師。登場人物還有要向殺手先生報殺父之仇的17歲巨乳美少女、與殺手先生有多次近距離接觸的警長、一條名為“五郎”的警犬。本動畫每集篇幅為3分鐘，充滿了大量令人捧腹的冷笑話，可以說是以殺手先生為中心的冷笑話集錦。殺手先生雖然長相帥氣，為人冷酷，實際上是個冷面笑匠，與美少女、警長等角色的接觸中，產生各種超乎意料的搞笑橋段。 本動畫改編自TAMACHIKU創作的四格漫畫。
影片講述了聯邦調查局特工李·哈克受命調查一樁懸而未決的連環殺人案件，哈克發現與兇手有私人關系，因此必須在他再次發動襲擊之前阻止他。
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